人胰島素(su)(INS)酶聯免疫吸附(fu)測定試(shi)劑盒使(shi)用說明書

實驗原理(li) ：

本試劑(ji)盒采用雙抗體(ti)夾(jia)心法酶聯免疫(yi)吸(xi)附試驗 (ELISA) 。往預先包被有人胰島(dao)素(INS) 捕獲抗體的微孔中， 依次加入樣(yang)本、標(biao)準品(pin)、生物素標(biao)記(ji)的檢測抗體(ti)，HRP 酶結合物，中間經過溫育和洗滌，用底物 TMB 顯(xian)色，TMB 在(zai)過(guo)氧化(hua)物(wu)酶(mei)(HRP)的(de)催化(hua)下轉(zhuan)化(hua)成藍色(se)，并在(zai)酸(suan)的(de)作用下轉(zhuan)化(hua)成最終的(de)黃色(se)。顏色(se)的(de)深淺和樣品中的(de)人(ren)胰島素  (INS) 呈正(zheng)相關。用酶標儀在 450nm 波(bo)長下測定吸光(guang)度 (OD 值(zhi)) ，計算樣品濃度。

操作(zuo)步驟 ：

1.  從室溫平衡 10 分鐘后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  加樣：分(fen)別將(jiang)樣品(pin)或不同(tong)濃(nong)度標準品(pin)按照 100 μ l 每孔加入(ru)相應(ying)孔中，空(kong)白(bai)孔加入(ru) 100μL 通(tong)用稀釋(shi)液。蓋 上封板(ban)膜后(hou) 37℃溫育 1 小時。  (建議(yi)：將待(dai)測(ce)樣本用(yong)通(tong)用(yong)稀釋液稀(xi)釋 1 倍后再加(jia)入酶標板內(nei)測試(shi)。從(cong) 而減少基質效應(ying)對測試結果的誤差影響(xiang)，最(zui)后(hou)計(ji)算樣本濃度時需乘以對應(ying)的稀釋倍數。所有的待(dai)測樣本和 標(biao)準品在檢測中建議設立復孔(kong)) 。

3.  加生物素化(hua)抗體(ti)：取(qu)出酶標(biao)板，棄去液(ye)體(ti)，不用洗滌。每孔直接加入(ru)生物素化(hua)抗體(ti)工作液(ye) 100 μL，蓋上封 板膜后 37℃溫育 1 小時。

4.  洗板：棄去(qu)液體，每孔加入 300 μL 1x 洗(xi)滌液，靜置(zhi) 1 分鐘，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板

3 次 (也(ye)可用洗板機洗板) 。

5.  加酶結合物工作液：每(mei)孔加(jia)入酶結合(he)物(wu)工(gong)作液 100 μL，蓋上封板膜后 37℃溫育 30 分鐘。

6.  洗板：棄去液體按步(bu)驟 4 洗滌方法，洗板 5 次。

7.  加底物：每(mei)孔加(jia)入(ru)底物(TMB)90 μL，蓋上封板膜，37℃避光溫育 15 分鐘。

8.  加終止液：取出酶(mei)標板(ban)，每孔直接加入終止液 50 μL，立即(ji)在 450nm 波長處測定(ding)各孔的OD 值。

結(jie)果判斷：

1.  計算標準品和樣本復孔的平均 OD 值并減去空(kong)白孔的OD 值作為(wei)校正(zheng)值。以(yi)濃度為(wei)橫坐(zuo)標，OD 值為縱坐標， 在雙(shuang)對數坐標紙(zhi)上繪出四(si)參(can)數邏輯函(han)數的(de)標準曲(qu)線(作圖時去掉空白組的值)。

2.  若樣品OD 值高于標準曲線上限，應適當稀釋(shi)后重測并(bing)在計算樣(yang)本濃度時(shi)乘以相應的稀釋(shi)倍數(shu)。

典型數據和參考(kao)曲線：

以下(xia)數據和曲線(xian)僅供參考，實驗(yan)者需根據自(zi)己的實驗(yan)建立標(biao)準曲線(xian)。

試劑(ji)盒性能 ：

1.  重(zhong)復(fu)性(xing)：板內變(bian)異系數(shu)小于 10%，板間變(bian)異系數(shu)小于 10%。

2.  回收率：在選取的(de)健康(kang)人(ren)血清(qing)、血漿(jiang)和(he)組織勻漿(jiang)中加入(ru) 3 個不同濃度水平的人 INS，計算回收率

3.  線性(xing)稀釋：分別在選(xuan)取的 4 份健康人血清、血漿和組織勻漿中加入高濃度人 INS，在標(biao)準曲線動力學范圍

內(nei)進行稀釋，評估線性。評估線性。

本試劑盒(he)只能用(yong)于科學(xue)研(yan)究，不(bu)得用(yong)于醫學(xue)診(zhen)斷(duan)          6

注意事項(xiang)：

1.  嚴格按照規(gui)定的時(shi)間和(he)溫(wen)度進(jin)行溫(wen)育以保證準(zhun)確(que)結果。所有試劑都(dou)必須(xu)在使用(yong)前達到(dao)室溫(wen) 20-25℃ 。使用

后立即冷藏(zang)保(bao)存試劑。

2.  洗板不(bu)正確(que)可(ke)以(yi)導致不(bu)準確(que)的結果。在加入底物前確(que)保(bao)盡量吸干(gan)孔(kong)內液體。溫(wen)育過(guo)程中不(bu)要讓(rang)微孔(kong)干(gan)燥(zao)掉。

3.  消除板(ban)底殘留(liu)的(de)液體和手指印，否則(ze)影響OD 值。

4.  底物顯(xian)色液應呈無色或很淺的顏(yan)色，已經(jing)變藍的底物液不(bu)能使用。

5.  避免(mian)試劑和標本的交叉污染以(yi)免(mian)造成錯(cuo)誤(wu)結(jie)果。

6.  在儲存(cun)和溫(wen)育時避免強光(guang)直接照射。

7.  平衡至室溫后(hou)再打開(kai)密(mi)封袋以防水滴凝聚在冷板條上(shang)。

8.  任(ren)何反應(ying)試劑不(bu)能接(jie)觸漂(piao)白(bai)溶劑或(huo)漂(piao)白(bai)溶劑所散發的強(qiang)烈氣體。任(ren)何漂(piao)白(bai)成分(fen)都(dou)會破壞試劑盒中反應(ying)試劑

的生物活性(xing)。

9.  不能使用過期產品。

10. 如(ru)果可能傳(chuan)播(bo)疾(ji)病，所有的樣品都應(ying)管理(li)好，按(an)照規定的程序處理(li)樣品和檢測裝(zhuang)置(zhi)。